维生素C是一种酸性多轻基化合物，分子中有6个碳原子，碳-2、碳-3位置上相邻的两个烯醇式轻基容易发生解离并释放出氢离子，因此，维生素C是一种酸性物质，其性质类似于有机酸。维生素C较早被发现是因为它有治疗坏血病的功能，因此别名又叫抗坏血酸。它的分子式为C6H8O6，分子量为176.13，IUPAC名为2，3，5，6-四羟基-2-己烯酸-4内酯，是一种已糖衍生物，两种异构体分别为L型和D型，其中只有L型维生素C具有生理功能，且经常以两种存在形式出现，即还原型和氧化型，它们能在体内互相转化，且均具有生物活性。如下图

图1 维生素C分子式

维生素C是一种水溶性维生素，外观为无色结晶，酸性，没有气味，具有较强的还原性，性质非常不稳定，容易被环境中的热、氧、光或微量金属离子如亚铁离子、铜离子等或荧光物质如核黄素氧化分解，尤其是在碱性条件下。维生素C主要分布在水果、蔬菜中，因此，在日常生活中，水果的加工、蔬菜的烹饪等都要考虑这些环境因素，以免破坏维生素C，影响人体的摄入量。

大量研究表明，维生素C具有美白、延缓衰老的神奇功效，这主要是因为首先，维生素C能促进机体合成胶原蛋白和粘多糖，使肌肤保持紧致有弹性再次，维生素C能抑制酪氨酸酶的活性，减少肌肤黑色素沉积，美白肌肤再次，维生素C是一种高效的自由基清除剂。因此，维生素C作为一种美白、抗氧化护肤因子，己经被广泛应用于化妆品领域中。

然而，如果用直接添加的方式将维生素C配入化妆品中，由于维生素C性质极不稳定，容易被化妆品中其他的成分影响而失去功效。此外，水溶性维生素C不能突破皮肤角质层的障碍，渗透到皮肤内皮层发挥美容功效，因此，目前市面上出售的各种维生素C护肤品，其美容功效差强人意。

采用动态高压微射流技术制备的纳米脂质体不但解决了维生素C易被破坏的问题，同时它的纳米级尺寸赋予了其特殊的皮肤穿透能力。此外，动态高压微射流技术应用于制备脂质体，突破了大规模制备脂质体的技术瓶颈，制备脂质体时不需要大量使用有机溶剂，能实现工业化连续大生产，建立用于水溶性药物脂质体研发的技术平台，为其它水溶性药物脂质体的开发提供一些值得借鉴的意见。

主要仪器设备：

NanoGenizer微射流高压均质机 苏州微流纳米生物技术有限公司提供

旋转蒸发仪   上海亚荣生化仪器

纳米激光粒度仪   美国PSS

 方法与结果：

本实验采用四种经典、传统、适用于水溶性药物的脂质体制备方法薄膜分散法、逆相蒸发法、复乳法和乙醇注入法，分别联合动态高压微射流技术依次命名为薄膜分散-高压法、逆相蒸发-高压法、复乳-高压法、乙醇注入-高压法来制备维生素C纳米脂质体用不同的制备方法制备维生素C纳米脂质体，测定其包封率的结果如下图 

图2  4种制备方法对维生素C纳米脂质体包封率的影响

由图2可知，各种传统脂质体制备方法联用高压后制备的脂质体，其包封率大小相差甚远，以薄膜分散一高压法制得的脂质体包封率大至，乙醇注入高压法制得的脂质体包封率小至，其他两种方法相差不大，这说明薄膜分散法和高压具有良好的协同性，因此本实验选用薄膜分散-高压法制备维生素C纳米脂质体

单因素实验结果

制备温度对维生素C纳米脂质体包封率的影响

选择同一处方，固定其他组分的比例不变，即保持VC浓度为5mg/ml，卵磷脂：胆固醇=4：1，卵磷脂：无水乙醇=1：10，tween-80：总脂材=3：10，VC：总脂材=1:10，处理压力120MPa，处理次数2次，考察制备温度50℃、55℃、60℃、65℃、70℃对维生素C纳米脂质体包封率的影响，测定其包封率，结果如下图

图3制备温度对维生素C脂质体纳米包封率的影响

从图3可以看出，在65℃以前，包封率随着制备温度的升高逐渐增大，在65℃时达到大至，而在65℃以后，温度升高，包封率下降，且下降幅度较大，分析原因可能是温度比较低的时候，脂质双分子层膜形成速度慢，导致脂质材料一直浸泡在有机溶剂中，且这样形成的薄膜致密性欠佳，脂质体包封率小而当温度过高时，脂质双分子层膜形成速度快，磷脂和胆固醇没有办法充分紧密结合在一起，此时如果加入维生素C水溶液进行洗膜溶胀，得到的脂质双分子层膜结构松散，脂质体包封率不高，故本实验选取65℃为制备温度。

卵胆比对维生素C纳米脂质体包封率的影响

选择同一处方，固定其他组分的比例不变，即保持VC浓度为5mg/ml，卵磷脂：胆固醇=4：1，卵磷脂：无水乙醇=1：10，tween-80：总脂材=3：10，VC：总脂材=1:10，处理压力120MPa，处理次数2次，考察卵胆比大小（2：1、3：1、4：1、5：1、6：1，质量比）对维生素C纳米脂质体包封率的影响，测定其包封率，结果如下图

图4 卵胆比对维生素C纳米脂质体包封率的影响

由图4可知，维生素C纳米脂质体的包封率受卵磷脂和胆固醇的质量比影响比较小。当卵胆比小于时，随着卵磷脂比例的增大，包封率有所升高，但幅度不大在质量比为时，包封率大至之后随着卵磷脂比例的增大，包封率转而呈下降趋势。这是因为胆固醇是构成类脂膜的主要组成成分，是一种良好的膜流动性调节剂，能提高脂质体包封率，增强脂质体稳定性，但是并不是胆固醇越多越好，当膜内的胆固醇比例过大时，对应的卵磷脂比例过少，那么脂质材料便不容易形成薄膜，而且形成的脂膜脆弱，亲水性强且容易破损。因此，本实验选用卵胆比为4：1

表面活性剂用量对维生素C纳米脂质体包封率的影响

结果如下图

图5，Tween-80与总脂材的质量比对维生素C纳米脂质体包封率的影响

Tween-80（全名为聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯）是一种非离子型亲水性表面活性剂，同时含有亲水性、疏水性长链。脂质体中加入Tween-80后，两者通过物理吸附作用结合在一起，一在脂质体表面形成一道具有亲水性质的“立体屏障”，因此，用Tween-80作为表面活性剂制备出来的脂质体，其稳定性优于一般脂质体哪，但是Tween-80过多加入则会造成脂质体包封药物的泄露。由从图5可以看出，当Tween-80：总脂材小于3：10时，包封率随之增大而上升，过后则下降，故取Tween-80：总脂材为3：10。

制备压力大小对维生素C纳米脂质体包封率的影响

结果如下图

图6 处理压力大小对维生素C纳米脂质体包封率的影响

从图6可以看出，压力小于140MPa时，随着压力的增大，包封率也逐渐增大，当压力为140MPa时，包封率大至，但当压力大于140MPa时，随着压力的增大，包封率反而减小，其原因可能是适当的压力能促进磷脂分子自由组装形成脂质体，但是压力过大，则会迫使脂质体内包封的维生素C渗漏出来，从而使包封率减小。因此，本实验采用制备压力为140MPa。

药脂比对维生素C纳米脂质体包封率的影响

图7 药脂比对维生素C纳米脂质体包封率的影响

由图7可知，包封率随着脂质材料的增多而逐渐增大，这是因为脂质材料较少时，药物含量过高，形成的脂质膜不足以包封所以药物，造成了药物的浪费，因此，形成的脂质体包封率低，但是随着脂质材料的增多，虽然包封率逐渐呈上升趋势，但是单位重量的脂材包封的药物少，且形成的脂质体不均匀，粒度较大，因此选择总脂材与维生素C质量比为。

基于上述单因素实验的结果，设计正交分析实验优化纳米脂质体制备条件，其结果为保持维生素C浓度留5mg/ml，当制备温度60℃、药脂比为1：10、卵胆比质量比4：1、卵磷脂：无水乙醇1：10、Tween-80：总脂材为4：10、处理压力为140MPa、处理2次。对较好条件做验证实验，验证后得到实际包封率为47%士6%，本实验探索的维生素C纳米脂质体的制备方法重现性好，具有可行性。

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