血红蛋白氧载体是全球红细胞代用品研发的重要方向，但在安全与长效性能提升方面的进展相对缓慢，更难以实现临床转化。血紫蛋白分子稳定性及生物相容性优于人和哺乳动物血红蛋白，经过修饰可能成为更加安全长效的红细胞代用品。

为进一步降低血红蛋白氧载体新品的血管毒性或延长循环内滞留时间，多个研发中心从不同角度进行了探索。本实验在前期研究的基础上，尝试制备一种多重修饰的血紫蛋白基氧载体，并进行纳米表征检测。

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将血紫蛋白与京尼平按照质量比 5 ∶1 共同溶于 20 mL 去离子水中，在弱酸性条件下充分反应，超滤去除未反应的京尼平；加入足量盐酸多巴胺，调整 pH 值至弱碱性，充分反应后取沉淀物 ( 为聚多巴胺修饰血紫蛋白纳米粒 ) 复溶，加入适量 NH ₂-聚乙二醇5000-COOH 粉末，调整 pH 值至弱碱性，充分反应后，4度条件下 10000 r/min 离心 60 min，弃上清，沉淀物即为多重修饰血紫蛋白纳米粒，置于-40度下冷冻干燥 8 h 得冻干粉，4度以下保存备用。

图2 多重修饰血紫蛋白纳米粒的微观形貌 ( 透射电镜 )

透射电镜下可见多重修饰血紫蛋白纳米粒呈椭球形，有致密外膜，内部质地较为均匀，尺寸一致性良好。

图3 血紫蛋白多重修饰前后水合粒径、Zeta 电位及稳定性检测结果

注：GHrNPs 为血紫蛋白纳米粒。图 A-C 分别为血紫蛋白 (Hr)、聚多巴胺修饰血紫蛋白纳米粒 (PDA-GHrNPs)、多重修饰血紫蛋白纳米粒(PEG-PDA-GHrNPs)粒径分布图；D 为多重修饰血紫蛋白纳米粒与中间产物Zeta 电位对比图；E 为血紫蛋白修饰前后分散于 PBS 中的粒径变化

多重修饰血紫蛋白纳米粒、血紫蛋白的水合粒径分别为 (150.12±1.67)，(108.07±5.37) nm，分散指数分别为 0.21±0.03，0.31±0.09，Zeta 电位分别为 (-24.54±2.61)，(-23.99±2.23) mV。与血紫蛋白相比，多重修饰血紫蛋白纳米粒的水合粒径平均值增大 (P < 0.05)，分散指数减小 (P < 0.05)，Zeta 电位无显著差异 (P > 0.05)。多重修饰血紫蛋白纳米粒分散于 PBS中 4 d 粒径无明显变化，表现出良好的稳定性。

综上所述，基于性质更加稳定的血紫蛋白，成功构建了多重修饰血紫蛋白纳米粒，为血红蛋白氧载体研发积累了经验，未来经过动物实验验证后有望发展成为新型的红细胞代用品！

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