接上文 制备工艺优化过程本文中继续介绍。

制备方法

采用薄膜分散-微射流法制备脂质体：精密称取一定量的注射用磷脂、胆固醇、VE和生物碱A（磷脂与VE的质量比为15:1，其他比例见表1），加入适量乙醚振摇使其溶解，过滤后转移至250mL茄形瓶中，35℃水浴条件下减压蒸发除去有机溶剂，至瓶壁上形成均匀的脂质薄膜，用氮气去除残留溶剂。加入15mL的PBS缓冲液（pH7.4）和玻璃珠，35℃水浴条件下旋转水合30min，直至薄膜脱落溶解，得生物碱A脂质体粗悬液，适当声后，经高压微射流仪12000psi压力下循环12次，依次过0.8、0.45µm的滤膜进行整粒,即得生物碱A纳米脂质体。

实验设计采用Design-Expert8.0.6软件进行响应面优化设计,实验因素和水平见表1，结果见表2

表1实验因素及水平

表2响应面分析方案及结果

模型及数据分析

对试验结果进行二次回归拟合，得出拟合方程：Y=-177.06+11.05A+2.54B+3.88C-0.02AB-0.01AC+5.83×10-3BC-0.17A2-0.07B2-0.04C2(R2=0.9855)其中Y为包封率。方差分析结果见表3

表3 响应曲面模型方差分析表

由方差结果可知，该拟合方程的P＜0.0001，具有极大的显著性，Lack of fit检验的P＞0.05，说明没有失拟因素。三个因素对包封率都有较大的影响，其中磷脂浓度影响大至。拟合方程的R2=0.9855，表明该模型对生物碱A脂质体的制备具有较好的预测性。

响应曲面分析

因素C磷脂浓度为32.5mg·mL-1时，绘制A和B两个因素对包封率的三维响应图，如图1a；因素B磷脂与胆固醇的质量比为12.81:1时，绘制A和C两个因素对包封率的三维响应图1b，如图；因素A磷脂与药物的质量比为30:1时，绘制B和C两个因素对包封率的三维响应图，如图1c

图1三维响应图

由对三组响应曲面图都比较陡峭可知，三个因素对包封率的影响较为显著，分析响应面结果，确定脂质体较好处方为:A为30.58:1，B为15.22:1，C为42.26mg·mL-1。以此条件制备3批样品做验证试验，结果三批脂质体的平均包封率为92.89%，与预测值93.21%非常接近,表明该处方设计可信度较高。

本研究以包封率为指标，根据生物碱A的性质，比较了薄膜分散法、逆向蒸发法、乙醇注入法、乙醚注入法四种制备方法，较终确定用薄膜分散法制备生物碱A脂质体。以包封率为指标，单因素筛选有机溶剂，成膜温度，PBS缓冲液的pH，磷脂与VE、药物、胆固醇的比例和磷脂浓度等因素，其中磷脂与药物、胆固醇的比例和磷脂浓度。对包封率影响较大，将这三个因素采用Box-Benhnken模型进行三因素三水平的响应面试验，得出拟合方程：Y=-177.06+11.05A+2.54B+3.88C-0.02AB-0.01AC+5.83×10-3BC-0.17A2-0.07B2-0.04C2，该拟合方程的P＜0.0001，具有极大的显著性。三个因素对包封率都有较大的影响，其中磷脂浓度影响大至。拟合方程的R2=0.9855，表明该模型对生物碱A脂质体的制备具有较好的预测性。参考其三维响应图确定制备工艺以获得大至包封率的脂质体，相对于传统的筛选方法具有较高的优越性。

较终制备工艺为采用薄膜分散-微射流法制备脂质体，磷脂浓度为42.26mg·mL-1，磷脂与生物碱A的质量比为30.58:1，磷脂与胆固醇的比例为15.22:1，磷脂与VE的质量比为15:1，有机溶剂为乙醚，成膜温度为35℃，PBS缓冲液的pH7.4，35℃水浴条件下旋转水合30min，适当声后，经高压微射流仪120psig压力下循环12次，依次过0.8、0.45µm的滤膜进行整粒,即得生物碱A纳米脂质体。

制备样品粒径分布

取适量生物碱A脂质体，用蒸馏水稀释至适宜浓度后，用激光粒度分析仪测定其平均粒径及分布，结果见图2。

图2 微射流法制备生物碱A脂质体的粒径分布图

由结果可知，脂质体平均粒径为126nm，多分散系数PDI为0.139，生物碱A脂质体粒度分布较窄，符合肝靶向脂质体的粒度要求

微流纳米Vic